合成肽作为目前成本最低抗原肽模拟技术已经在免疫制备抗体行业广泛被接受，大量被用于模拟制造识别大生物分子的抗体的基本原料,特别是在制备甲基化抗体,磷酸化抗体和糖基化抗体方面,这项技术具有不可比拟的优势.

由于它操作技术简单,原材料成本低廉,生产周期较短以及人工场地要求简单的特点,被不少生物界同仁认为是未来五年海外生产向中国制造转移又一潜力产业.在过去的几年中，国内已经涌现出数十家进行大规模定制抗体的生产企业,主要集中在江浙沪一带.

    合成的多肽抗原由于分子较小,免疫到动物体内后很难产生免疫应急反应,因此在免疫前通常要偶联一个载体蛋白.常用的载体蛋白有血蓝蛋白(KLH),牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA).根据载体蛋白侧链氨基与多肽抗原上偶联位置的不同,我们定义为以下三种:N端氨基偶联,C端羧基偶联和Cys巯基偶联.

偶连的方式与偶连的活化剂和氨基酸组成有关。

通常有下列三种方法供选择：

1．EDC:通过C端羧基连接，一般要求序列中无Glu(E)，Asp (D)或一个酰胺化的C端

2．戊二醛通过N端的氨基偶连，要求序列中无Lys (K)或N端没有被乙酰化

3．MBS:通过Cys的巯基基团与载体上的氨基连接.如果序列中无Cys，可添加Cys或Mpa，最好增加在N端。

明皓生物提供以下藕连服务，分别用下列符号代表它们之间的组合：

MB01               BSA-Peptide N terminus

MB02C            BSA-Peptide C terminus

MB02Cys         BSA-Peptide Cys

MK01                KLH-Peptide N terminus

MK02C             KLH-Peptide C terminus

MK02Cys         KLH-Peptide Cys

MO11               OVA-Peptide N terminus

MO12C            OVA-Peptide C terminus

MO13Cys         OVA-Peptide Cys

      偶联好的载体复合物经过透析,再加入佐剂和进行乳化,就可以进行免疫了.经过一免,二免和增强免疫后,6-8周左右可以看到一个具有一般效价的制备多抗.这时候再通过取血,离心取上清的方法得到抗性血清.有条件的单位还通常会用标准蛋白Protein A/G进行抗体纯化,为了运输和储存需要有时会进行冻干处理.也有根据客户的需要用免疫的抗原挂到亲和层析柱上对抗体进行纯化,得到专一性更高的多克隆抗体.

 

    单抗的制备要稍微复杂一些,时间跨度会更长,一个项目结束下来要半年左右的时间.

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